无细胞表达-江苏赛索飞生物科技有限公司

无细胞表达

无细胞表达是体外模拟细胞内蛋白表达的过程。体外目标蛋白的合成可以通过外源性mRNA或DNA作为蛋白质合成的模板，人为控制蛋白质合成所需的底物和转录翻译相关蛋白因子来实现。细胞外蛋白表达特别适合小、中表达实验和高通量表达筛选实验。结合纳米盘技术甚至膜蛋白也可以在SPR和相互作用研究中充分表达。

赛索飞无细胞蛋白表达平台为您提供完整的技术服务，解决特殊蛋白，如膜蛋白、毒性蛋白等，表达的难题。赛索飞也可制备个性化膜蛋白质复合物，以及平行合成各种不同蛋白质，进行高通量蛋白筛选。

公司技术团队在GPCR、离子通道蛋白、水通道蛋白、转运蛋白等方面具有丰富的实践经验，可为客户提供全方位的解决方案。提供灵活的服务，以满足不同层次的需要。

无细胞表达服务规范

无细胞表达服务内容

服务类型	服务内容
无细胞体系的膜蛋白表达优化服务	基因合成、载体构建、密码子优化、纯化标签设计表达产量优化：Mg2+、K+筛选，膜蛋白产量稳定在1mg以上可溶表达条件优化：去垢剂（detergent）、磷脂（liposome、Nandisc）;针对不稳定蛋白的稳定剂筛选样品表征：SDS-PAGE、Westernblot、Geel-filtration 样品功能检测：ligand binding（SPR、QCM-D、NMR）
个性化膜蛋白制备	C13、N15核磁蛋白样品制备（solid state/solution state NMR）选择性标记特定氨基酸 (Selective labeling/combinatorial labeling) 插入非天然氨基酸
全场膜蛋白抗原制备	高效合成全长膜蛋白可溶条件筛选
膜蛋白产品	GPCR: ETA, ETB, beta1-adrenergic receptor，bacteria-Rhodopsin, proteo-Rhodopsin Aquaporin: AqpZ; mAQP4; AQP1… Ion Channel: KcsA Bacteria toxin: alpha-hemolysin
个性化抽提物	S12, S30, S60, S100, S150 Various E.coli strain: A19, D10, BL21, Rosetta…

无细胞蛋白表达实验流程

1. 密码子优化

表达式构造是根据所选的表达式系统而定制的。我们通常从表达野生型蛋白的序列优化的全长基因开始。

2. 表达优化

在小规模的筛选实验(50 - 200µL)中,关于表达条件优化的方面：

· 表达载体/启动子的选择

· 亲和力纯化标签的类型和位置

· 优化表达条件来提高产量

· 可选：筛选最佳表达域

· 可选：筛选二硫化物形成蛋白的反应条件

膜蛋白表达还有其他选择：

· 无添加剂：表现为不溶性颗粒，随后再折叠

· 使用清洁剂：清洁剂的类型和浓度

· 使用纳米圆盘：纳米圆盘的直径和磷脂的组成

提供实验报告文件，包括SDS-PAGE和WESTERN BLOT。

3. 小量纯化筛选

通过亲和磁珠对小规模实验获得的蛋白质进行纯化，定制亲和基质可用于分离活性配体结合蛋白部分。

本步骤提供了完整的实验报告，包括SDS-PAGE和WESTERN BLOT数据

4. 大量蛋白表达纯化

根据客户所需量进行放大表达和纯化，从2和3中获得的结果中，可以计算出目标蛋白质的实际表达量以及需放大的量。

5. 蛋白精纯

将目标蛋白质精纯，可以使用亲和层析、离子交换色谱和凝胶过滤方法。

可根据需要合成定制亲和基质，分离活性配体结合蛋白部分。

6. 蛋白质特性检测

纯化后的蛋白质的酶活性、检测配体结合和结构完整性。

如何订购无细胞表达服务？

请将您的需求发送至 order@genecfps.com。您也可以致电 0510-85220969联系我们。

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