基因合成案例1—13.7kb基因+载体改造
合成拼接13.7kb基因序列并克隆到客户指定载体的指定位点,序列经测序验证正确,成功交付高质量的质粒。
项目难点
赛索飞解决方案
序列长度13.7 kb,拼接时易出现缺失
资深技术专家负责订单设计,利用自主研发的专有组装技术进行拼接,确保得到正确的全长序列
客户提供的载体,目的基因插入位置没有合适的酶切位点
改造载体,成功将目的序列克隆到改造后载体的指定位置
低拷贝载体,制备困难
使用自制的特殊感受态和配方培养基,增加质粒拷贝数。
基因合成案例2—难度序列合成(PolyA)
成功合成并测序验证含有110个连续PolyA结构的基因序列,为客户交付序列正确的质粒。
序列中有大段重复结构,其中有长达110个碱基的连续PolyA结构,连续的单碱基重复易导致质粒不稳定和测序信号异常
针对该序列设计特定的合成方案
优化构建和克隆方案,减少突变的出现
优化测序方案,确保准确验证
基因合成案例3—难度序列合成(高GC与重复序列)
成功合成并测序验证含有高GC、大量正向DNA重复和Poly结构的序列,为客户准时交付100%序列正确的质粒。
序列中高GC片段总长度占比~35%,且GC波动大。G、C之间形成三对氢键,解链所需能量较高,模板很难打开,易导致非特异性扩增,甚至难以扩增出靶基因
针对该序列设计特定的合成方案,将全长进行分段合成
利用自主研发的专有组装技术进行拼接,确保得到正确的全长序列
正向DNA重复和Poly结构占比>30%,重复序列增加拼接难度,而poly结构测序难度大,大段重复给测序带来难度
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